trizol法同时提取rna,dna,蛋白质-第章

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操作步骤：　
1。取沉淀DNA后剩余的上清，用异丙醇沉淀蛋白质。每使用1ml　TRIzol加1。5ml异丙醇，室温放置10分钟，2…8℃12000×g离心10分钟弃上清。　
2．用含0。3M盐酸胍的95％乙醇洗涤蛋白质沉淀。每使用1ml　TRIzol加2ml洗涤液，室温放置20分钟，2…8℃7500×g离心5分钟，弃上清，重复两次。用2ml无水乙醇同样方法再洗一次。　
3．真空抽干蛋白质沉淀5…10分钟，用1％SDS溶解蛋白质，反复吸打，50℃温浴使其完全溶解，不溶物2…8℃10000×g离心10分钟除去。分离得到的蛋白质样品可用于Western　Blot或…5至…20℃保存备用。　
注意事项：　
1。蛋白质沉淀可保存在含0。3M盐酸胍的95％乙醇或无水乙醇中2…8℃一个月以上或…5至…20℃一年以上。　
2．用0。1％　SDS在2…8℃透析三次，10000×g离心10分钟取上清即可用于Western　Blot。　
常见问题分析：　
得率低：A。样品裂解或匀浆处理不彻底　
B．最后得到的蛋白质沉淀未完全溶解　
蛋白质降解：组织取出后没有马上处理或冷冻　
电泳时条带变形：蛋白质沉淀洗涤不充分