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羠＋h获得的试验结果列于表5…1。
表7…1 用rh＋×r＋h所得的4种噬菌斑数及算得的重组值
杂交组合 每种基因型的百分率 重组值
rh＋ r＋h r＋h＋ rh
rah＋×r＋h
rbh＋×r＋h
rch＋×r＋h 34。0
32。0
39。0 42。0
56。0
59。0 12。0
5。9
0。7 12。0
6。4
0。9 24％
12。3％
1。6％
根据表5…1结果，可以分别作出 ra、rb、rc与h的3个连锁图：
m 24 h
rb←12。3→h
rc←1。6→h
由于3个不同的r突变分别位于3个不同基因内，3个r基因与h基因在T2噬菌体染色体上有以下4种可能的排列顺序：
ra rb rc h
ra rc h rb
ra rb h rc
ra h rc rb
为了确定以上排列顺序哪些是正确的，可先只考虑rb、rc及h来确定是rc…h…rb还是h…rc…rb。为此还需作rcrb＋×rc＋rb杂交，测得其重组值为14％。将其重组值14％与rb…h之间的距离12。3％进行比较，据此可知h应位于rb和rc之间，所以排列顺序应是rc…h…rb。至于ra在h的哪一边，是靠近rb还是靠近rc？上述资料并未给予明确回答。由于T2噬菌体的染色体是环状的，所以ra…rc…h…rb和rc…h…rb…ra这2种排列顺序都是正确的。可将这4个基因用环状连锁图表示如下：
h
rc
rb
ra
在上述噬菌体遗传作图中，尽管资料开始很混乱，但是一旦了解染色体的环状构型后，进行重组分析和构建连锁图就相当便捷。
5。2。2 基因的细微结构作图
5。2。2。1 T4噬菌体rⅡ区的作图
同λ噬菌体一样，利用T4噬菌体的突变型，也可以检验T4噬菌体的基因重组。T4噬菌体中最先发现的突变型就是噬菌斑突变型。噬菌体T4中包括rⅡA和rⅡB基因的区段是一个广泛分析过的区段。快速溶菌r突变型产生的噬菌斑比野生型（r＋）颗粒大而界限更分明。这些突变型可与野生型相区别，因为后者在大肠杆菌B、S、K菌株上形成小而绒毛状的噬菌斑，而rⅡ突变型在B菌株上形成r型噬菌斑，在S菌株上形成野生型r＋噬菌斑，在K菌株上则根本不形成噬菌斑（图5…10a）。如果一个寄主细菌同时受到2个遗传型不同的噬菌体同时侵染，那么2个噬菌体染色体就会在被侵染的细胞中一起复制。其中有些会发生遗传重组，并产生新的具双亲标记的重组型。被侵染的细胞裂解后，根据对子代噬菌斑的分析，就可测定其中是否含有重组型。Benzer采用rⅡ突变型成对杂交，计算每对突变位置间的重组频率。他用每对rⅡ突变体对大肠杆菌B株进行双重感染，裂解后获得子代噬菌体。然后将裂解液涂布在rⅡ突变型和r＋噬菌体都能生长的大肠杆菌B株上，从而计数各种噬菌斑的数目。而要确定重组型的数目就只有将裂解液置于只有r＋重组型才能生长的大肠杆菌K株上（图5…10b）。由于双突变型的重组型不能检出，因此，重组值的估算值应乘以2。
重组可以发生在基因之间，也可以发生在某个基因之内，后者称为基因内重组（intragenic rebination）。基因内重组也是生物体遗传物质重组的普遍现象，因为基因实际上就是遗传物质的一个区段，当基因内某一位点受到损伤，就会使生物体表现出非野生型的表型，这种现象就是基因突变（gene mutation）。如果某个等位基因内部在不同位点上受到损伤，就会形成不同的突变等位基因，从而产生不同表型特征。将突变基因a1和a2分别以下列图像表示：
a1 * * * 双突变
a2 * 野生型
其中*表示正常基因内的突变位点，二者杂交，我们就可以清楚地看到，2个突变位点之间通过单交换，就可产生正常的野生型基因。
Benzer根据对T4噬菌体rⅡ区的研究认为，基因是由许多小的单位组成的，这些单位之间可以进行重组，但单位之内则不能发生重组。我们现在知道，重组的最小单位可以小到只有DNA分子中的一对碱基。
将各种突变体成对地进行杂交，计算基因内重组的相对频率，我们就可排出某个基因内各种突变位点之间的顺序和相对位置。所以根据基因重组可以建立详细的基因图如rⅡ区的精细结构图5…11。基因内得组作图与基因间重组作图一致的，其差别只是距离大小有所不同。
图5…10 T4噬菌体的重组分析
各种突变位之间的顺序和相对位置。所以根据基因内重组可以建立详细的基因图。如rⅡ区的精细结构图5…11。基因内重组作图与基因间重组作图是一致的，其差别只是距离大小有所不同。
5。2。2。2 缺失作图
采用前述重组作图方案需要对所有突变体成对进行杂交，若要对数千个突变体进行分析，就要作数百万次杂交，这几乎是件不可能实现的事情，但对Benzer采用了另一种非常有效的方法对所获得的突体进行作图，他依据这些突变体在rⅡ区中的位置，将其分成47个不同组进行初步筛选。一旦某个突变体被归入一个组对后，只要将其与
同组中其他成员杂交，就可精确地对其定位。这种初
步筛选方法称为缺失作图（deletion mapping）。
缺失是指某个基因丢失了相当大一部分，或者
丢失整个基因，甚至一个以上基因。假定有2种突变
体如图5…12，我们可以利用这2种缺失确定该基因中
有3个不同区域。将各种突变体分别与含有缺失1和
缺失2的突变体进行杂交，选择野生型重组体。如果
某个突变不能与缺失1但能与缺失2产生野生型重组
体，就可知道该突变位点位于a亚区，同时，我们还可知道b亚区或c亚区中的突变体也都不能与缺失2杂交产生野生型重组体。另一方面，如果某个突变体不能与缺失2但能与缺失1产生野生型重组体，那么该突变位点必须位于c亚位。同样道理，如果该区段中某种突变既不能与缺失1，也不能与缺失2产生野生型重组体，该突变必然位于这2个缺失区的重叠区即b亚区之内。采用这种缺失作图法，Benzer确定了rⅡ区中47个不同的亚区，每一亚区都是通过一组缺失末端加以确定的。这些亚区以及用于确定这些亚区的缺失突变如图5…13所示。Benzer是如何进行缺失作图的呢？他首先将某个新突变体分别与图5…13顶端的7个缺失突变体（1272～638）进行
图5…13 rII区的精细缺失作图
水平粗线表示缺失的末端，从A1到B10为通过缺失突变体鉴定出的47个亚区段，水平粗线的左端为缺失
突变体的名称，其中有些缺失突变超出了rII区之外。垂直粗线示主亚区，垂直红线为主亚区中的次亚区
杂交，对突变位点大致定位。例如，如果某个突变不能与缺失突变体1272但能与1241进行重组，产生野生型重组体，则该突位于rⅡ区左端的Ala、A1b1或Alb2亚区内。为了确定这3个亚区中
究竟哪一个含有该突变体，可将这3个亚区分别与缺失的1364和EM66进行杂交。假定该突变体能与缺失EM66进行重组，而不能与1364重组，则该突变体必定位于A1b1亚区内。然后只要将该突变与位于这一亚区的其他突变体杂交，就可作出该突变的精细图。Benzer在对rⅡ区中数百个自发突变进行定位时发现，这些突变并不均匀地分布在rⅡ区内，有些位点根本不发生突变，有些位点则可反复地发生突变。在Benzer筛选的1612个突变体中有500个以上突变发生在同一位点之内，他将这些突变发生率高的位点称为热斑（hot spot）。这与化学诱变结果相一致。
5。2。3 互补测验和顺反测验
互补测验（plementation test）是用来确定影响某一种表型效应的一些突变是属于等位基因内突变还是属于非等位基因间突变。进行这样的分析，需要在同一细胞内建立2个突变体的二倍体或部分二倍体。因为从功能角度上来讲，属于同一基因的2个突变体是不能互补的（图5…14a），如果2个突变型能够互补，就说明它们属于2个基因，例如图5…14b中，同一细胞中的一个染色体上的基因a发生了突变，而它的基因b是完好的，另一个同源染色体上基因b发生了突变，可是它的基因a是完好的。由于彼此补偿了对方突变基因带来的缺陷，所以细胞的表型是正常的即野生型。如果2个突变基因是在同一个染色体上，而另一个同源染色体上的这2个基因是正常的，结果也相同。如果2个突变型都是在基因a座位上发生突变，那么在它们分处于2个同源染色体上时，便缺少了野生型基因a，因此细胞的表型是突变型。如果这2个突变型都位于同一个染色体的基因a座位上，由于另一个同源色体上的基因a是完好的，因此细胞的表型是正常的（图5…14c）。2个突变分别位于2条同源染色体上的基因组合称为反式构型（in trans）；而当2个突变位于同一个染色体上的基因组合称为顺式构型（incis）。比较顺式和反式构型细胞的表型从而判断2个突变是否属于同一基因的测验，称为顺反测验（cis…trans test）或互补测验。
Benzer通过互补分析发现T4噬菌体rⅡ突变型可分为rⅡA和rⅡB两组（图5…13），一组中的任何成员可与另一组中的任何成员互补。他的遗传分析结果证明，所有rⅡA突变型在rⅡ区的一端从A1到A6，所有rⅡB突变型在rⅡ